сасава

Принципи и методи за количествен анализ чрез течна хроматография

Принципи и методи за количествен анализ чрез течна хроматография

 

Механизмът на разделяне на течната хроматография се основава на разликата в афинитета на компонентите в сместа към двете фази.

Според различните стационарни фази течната хроматография се разделя на течно-твърда хроматография, течно-течна хроматография и хроматография със свързана фаза.Най-широко използваните са течно-твърда хроматография със силикагел като пълнител и хроматография със свързана фаза с микросилициев диоксид като матрица.

Според формата на неподвижната фаза течната хроматография може да бъде разделена на колонна хроматография, хартиена хроматография и тънкослойна хроматография.Според адсорбционния капацитет може да се раздели на адсорбционна хроматография, разделителна хроматография, йонообменна хроматография и гел проникваща хроматография.

През последните години към системата за течна колонна хроматография беше добавена система за течен поток с високо налягане, за да накара подвижната фаза да тече бързо под високо налягане, за да се подобри ефектът на разделяне, така че високоефективната (известна също като течна хроматография с високо налягане) се появи.

ЧАСТ
01 Принцип на количествения анализ на течната хроматография

За количествено определяне въз основа на качествени са необходими чисти вещества като стандарти;

Количественото определяне чрез течна хроматография е относително количествен метод: това означава, че количеството на аналита в сместа се оценява от известно количество чиста стандартна проба

ЧАСТ
02 Основа за количествено определяне чрез течна хроматография

Количеството на измерения компонент (W) е пропорционално на стойността на реакцията (A) (височина на пика или площ на пика), W=f×A.

Коефициент на количествена корекция (f): Това е константата на пропорционалността на формулата за количествено изчисление и нейното физическо значение е количеството на измерения компонент, представен от стойността на единичния отговор (пикова площ).

Коефициентът на количествена корекция може да се получи от известното количество стандартна проба и нейната стойност на отговор.

Измерете стойността на реакцията на неизвестния компонент и количеството на компонента може да се получи чрез количествения корекционен фактор.

ЧАСТ
03 Общи термини в количествения анализ

Проба (проба): разтвор, съдържащ аналит за хроматографски анализ.Разделени на стандартни и неизвестни проби.

Стандарт: Чист продукт с известна концентрация.Неизвестна проба (непозната): Сместа, чиято концентрация трябва да се тества.

Тегло на пробата: Първоначалното тегло на пробата, която ще се тества.

Разреждане: Факторът на разреждане на неизвестната проба.

Компонент: хроматографският пик, който трябва да се анализира количествено, т.е. аналита, чието съдържание е неизвестно.

Количество на компонента (количество): съдържанието (или концентрацията) на веществото, което ще се тества.

Цялост : Изчислителният процес на измерване на площта на пика на хроматографски пик от компютър.

Крива на калибриране: Линейна крива на съдържанието на компонента спрямо стойността на реакцията, установена от известно количество стандартно вещество, използвана за определяне на неизвестното съдържание на аналита.

1668066359515 图片4

ЧАСТ
04 Количествен анализ на течна хроматография

1. Изберете хроматографски метод, подходящ за количествен анализ:

l Потвърдете пика на открития компонент и постигнете разделителна способност (R), по-голяма от 1,5

l Определете консистенцията (чистотата) на хроматографските пикове на тестваните компоненти

l Определяне на границата на откриване и границата на количествено определяне на метода;чувствителност и линеен обхват

2. Създайте калибровъчна крива със стандартни проби с различни концентрации

3. Проверка на точността и прецизността на количествените методи

4. Използвайте съответния софтуер за управление на хроматографията, за да приложите събиране на проби, обработка на данни и докладване на резултатите

ЧАСТ
05 Идентифициране на количествени пикове (качествени)

Идентифицирайте качествено всеки хроматографски пик, който трябва да бъде количествено определен

Първо, използвайте стандартната проба, за да определите времето на задържане (Rt) на хроматографския пик, който трябва да се определи количествено.Чрез сравняване на времето на задържане, намерете компонента, съответстващ на всеки хроматографски пик в неизвестната проба.Хроматографският качествен метод е да се сравни времето на задържане със стандартната проба.Критерият Недостатъчендопълнително потвърждение (качествено)

1. Стандартен метод на добавяне

2. Използвайте едновременно други методи: други хроматографски методи (променете механизма, като например: използване на различни хроматографски колони), други детектори (PDA: сравнение на спектъра, търсене в библиотека от спектър; MS: анализ на масов спектър, търсене в библиотека от спектър)

3. Други инструменти и методи

ЧАСТ
06 Потвърждение на количествена пикова консистенция

Потвърдете консистенцията на хроматографския пик (чистота)

Уверете се, че има само един измерен компонент под всеки хроматографски пик

Проверете за смущения от съвместно елуиращи вещества (примеси)

Методи за потвърждаване на хроматографската пикова консистенция (чистота)

Сравняване на спектрограми с фотодиодни матрични (PDA) детектори

Идентификация на пикова чистота

2996 Теория на ъгъла на чистота

Количествени методи, използвани обикновено в ЧАСТ 07

Метод на стандартната крива, разделен на външен стандартен метод и вътрешен стандартен метод:

1. Външен стандартен метод: най-използван в течната хроматография

Бяха приготвени серия от стандартни проби с известни концентрации, като се използваха чисти проби от съединенията, които трябва да бъдат тествани като стандартни проби.инжектиран в колоната до нейната стойност на реакция (пикова площ).
В рамките на определен диапазон има добра линейна връзка между концентрацията на стандартната проба и стойността на отговора, а именно W= f×A, и се прави стандартна крива.

При абсолютно същите експериментални условия, инжектирайте неизвестната проба, за да получите стойността на реакцията на компонента, който ще се измерва.Съгласно известния коефициент f може да се получи концентрацията на компонента, който трябва да се измери.

Предимствата на външния стандартен метод:проста работа и изчисление, това е често използван количествен метод;няма нужда всеки компонент да бъде открит и елуиран;изисква се стандартна проба;условията на измерване на стандартна проба и неизвестна проба трябва да са последователни;инжекционният обем трябва да е точен.

Недостатъци на външния стандартен метод:Експерименталните условия трябва да бъдат високи, като чувствителността на детектора, скоростта на потока и съставът на подвижната фаза не могат да бъдат променяни;обемът на всяка инжекция трябва да има добра повторяемост.

2. Вътрешен стандартен метод: точен, но проблемен, използван най-често в стандартните методи

Известно количество от вътрешния стандарт се добавя към стандарта, за да се получи смесен стандарт и се подготвят серии от работни стандарти с известна концентрация.Моларното съотношение на стандарта към вътрешния стандарт в смесения стандарт остава непроменено.Инжектирайте в хроматографската колона и вземете (пикова площ на стандартна проба/пикова площ на вътрешна стандартна проба) като стойност на отговора.Съгласно линейната връзка между стойността на реакцията и концентрацията на работния стандарт, а именно W= f×A, се прави стандартна крива.

Известно количество вътрешен стандарт се добавя към неизвестната проба и се инжектира в колоната, за да се получи стойността на реакцията на компонента, който трябва да се измери.Съгласно известния коефициент f може да се получи концентрацията на компонента, който трябва да се измери.

Характеристиките на метода на вътрешния стандарт:По време на операцията пробата и вътрешният стандарт се смесват заедно и се инжектират в хроматографската колона, така че докато съотношението на количеството на измерения компонент към вътрешния стандарт в смесения разтвор е постоянно, промяната на обема на пробата няма да повлияе на количествените резултати..Методът на вътрешния стандарт компенсира влиянието на обема на пробата и дори подвижната фаза и детектора, така че е по-точен от метода на външния стандарт.

1668066397707 SAEWBVЧАСТ
08 Фактори, влияещи върху резултатите от количествения анализ

Лошата точност може да бъде причинена от:

Неправилно интегриране на площта на пика, разлагане на пробата или примеси, въведени по време на подготовката на пробата, флаконът с пробата не е запечатан, изпаряване на пробата или разтворителя, неправилна подготовка на пробата, проблеми с инжектирането на пробата, неправилна подготовка на вътрешния стандарт

Възможни причини за лоша точност:

Неправилна пикова интеграция, проблеми с инжектирането или инжектора, разлагане на пробата или примеси, въведени по време на подготовката на пробата, хроматографски проблеми, влошена реакция на детектора

 


Време на публикуване: 10 ноември 2022 г